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检测水中大肠埃希氏菌O157:H7的HiMedia显色培养基

DIANJICISHU:145   FABUSHIJIAN:2019/11/13 15:48:23

 现在,市面上能见到的显色培养基大多用于食品和临床,但HiMedia厂家生产的显色培养基覆盖面广,能用于供水行业和环境监测站。下面为您介绍一下。

 

显色培养基的评价常有多个指标,如灵敏度,特异性等,它们也与所检测的样本类型有关。生产厂家经常不提供这些指标。但一些第三方检测中心或研究机构对此则有相关研究,并发表在专业期刊上。

 

2011年,《学术研究国际期刊》发表了一篇对显色培养基的比较研究。作者来自埃及国家研究中心水污染研究部,他们通过用显色培养基检测了水中的大肠埃希氏菌O157:H7,对显色培养基进行了评价(见参考文献1)。

 

作者指出,在水中,E. coli O157:H7可以极低水平存在,伴随大量竞争菌群。传统方法需要超过48小时完成培养,同时还需进一步的生化鉴定和血清学鉴定。依据原理主要是SMAC平板,在麦康凯琼脂基础上用山梨醇替代乳糖,E. coli O157:H7不能发酵山梨醇。该方法存在一定的偏差,因为有些E. coli O157:H7菌株可以发酵山梨醇。

 

显色培养基的出现可改善这一检测方法。研究者采用HiMedia公司生产的HiCrome EC O157:H7 Selective agar。因为存在特异性显色底物,E. coli O157:H7菌落呈现深紫色,E. coli菌落则呈现淡粉色至淡紫色。

 

研究者收集了尼罗河地表水的60个水样本。收集水平遵照了200年APHA发布的指南。所有水样均收集在无菌的1L玻璃瓶中(Simax品牌,捷克共和国产),并在4℃条件下运输到实验室。所有样品在收集后6小时内进行细菌学检查。

 

研究用的E. coli O157:H7标准菌株编号为ATCC 43895。研究者除采用了HiMedia出的HiCrome EC O157:H7 Selective agar(简称HEC)外,还采用了美国Biolog 产的Rainbow agar O157(简称RB)。该平板为无色,在上面E. coli菌落呈现红紫蓝黑等不同颜色,E. coli O157:H7呈现深灰色至深黑色。而其他葡萄糖醛酸酶阳性菌株呈现红色或洋红色菌落。该培养基添加有新生霉素和亚碲酸盐。

 

研究遵循了2005年APHA指南,采用薄膜过滤法对E. coli O157:H7进行了检测和计数。滤膜放置在培养基上,37℃倒置孵育24小时。对典型菌落计数,单位为CFU/100 ml。菌落的进一步确证采用PCR法。*终计算得出灵敏度(真阳性率)、特异性(真阴性率)、总有效率(即(真阳性+真阴性)×100/总数),并进行统计学分析(t检验)。

 

结果见表1、表2、表3和表4。

 

表1. 在不同培养基上,E. coli O157:H7标准菌株的菌落特征

菌株

培养基

阳性菌落

正确数 (%)

假阴性菌落

假阴性数(%)

E. coli O157:H7

HEC

深紫/紫红

30 (93.8)

淡粉/淡紫

2(6.2)

RB

灰/黑

30 (93.8)

不同颜色(如红紫蓝)

2(6.2)

 

表2. 非E. coli O157:H7菌株在不同培养基上的菌落情况

菌株

培养基

真阴性结果 (%)

假阳性结果(%)

E. coli O157:H7

HEC

10 (100)

0(0.0)

RB

9 (90.0)

1(10.0)

 

表3. 培养基分离标准菌株的有效性

 

HEC

RB

PCR

真阳

30

30

30

真阴

10

9

9

假阳

0

1

1

假阴

2

2

1

灵敏度

93.7%

93.7%

96.7%

特异度

100%

90%

90%

有效率

95.2%

92.8%

95.1%

 

表4. 60个尼罗河水样在不同培养基上E. coli O157:H7的假阳性率

 

分离株数量

假阳性数(%)

HEC

80

5(6.25)

RB

80

8(10.0)

 

可见,HiCrome EC O157:H7 Selective agar分离E. coli O157:H7具有更高的灵敏度和特异度,并已被PCR进一步确证。显色培养基不失为一种灵敏、快速、特异的方法,并且无须任何确证试验。

 

HiMedia公司是国际知名微生物产品生产商,具有40多年生产研发经验,具有WHO-GMP认证、ISO9001,ISO13485质量体系认证和CE、FDA注册登记。产品已行销世界上140多个国家。

 

缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商,在微生物培养和检测领域,一如既往地为您带来优质的服务。

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